「それ弟じゃなくね?」とは「その人、弟じゃないんじゃない?」という意味の表現です。このフレーズは兄弟や家族関係を指摘する時に使われることが多く、その人が本当に弟なのかどうか疑問を持つことを表現する際に使われます。
また、今はYouTubeの「Shorts」という機能を使って、短い動画を投稿することが流行っています。その中で、マイクラというゲームのプレイ動画を「それ弟じゃなくね?」というタイトルで投稿することで、兄弟や家族関係をネタにしたコメディ的な動画を作ることができます。この表現は最近では主に「Shorts」での動画で使われているようです。

ウクシソウタデェスwww
ちゃんとかみかぜくんの墓作ってくれたり日に当たらないようにしたりゾンビに戻してあげるしいちゃんねるさん優しすぎる
頭のちっこい奴可愛い
弟くん当たらないようにする時オムライスくんの乳首に見える(ぼくだけ?)
いつの間にか弟出来てて笑ったw
あと可愛い
体育の先生アニメキャラみたいな綺麗な逆三角形してる ww
ついに3人目の声までやりだしたw
弟の服はケチャップ
おむらいす …筋トレしてもしぬときは、しにます。
宇宙キター!と言って欲しい